監(jiān)測(cè)報(bào)告基因(Reporter Gene)

rhTNF-α刺激誘導(dǎo)的HEK293 細(xì)胞中,rhGFP 報(bào)告基因表達(dá)的 NF-κB 的活性。在用pNF-κB-rhGFP 報(bào)告基因轉(zhuǎn)染的 HEK293 細(xì)胞中,用 3 倍稀釋的rhTNF-α處理。圖像以15min 為間隔獲得。對(duì)象飽和度(Object Confluence)表示報(bào)告基因的表達(dá)和/或啟動(dòng)子的活性。
關(guān)鍵特征(與傳統(tǒng)的終點(diǎn)熒光素酶方法對(duì)比)
1)數(shù)據(jù)豐富:可獲得終 點(diǎn)法無(wú)法得到的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)的圖像和數(shù)據(jù);
2)節(jié)約成本:無(wú)需裂解,無(wú)需熒光 素酶法需要的終端反應(yīng)底物,節(jié)省時(shí)間和花費(fèi);
3)方便:動(dòng)態(tài)的數(shù)據(jù)使用戶能在單個(gè)的實(shí)驗(yàn)中優(yōu)化信號(hào)窗(signal window),無(wú)需事先決定何時(shí)終止實(shí)驗(yàn);
4)敏感:可得到每個(gè)條 件下的多個(gè)時(shí)間點(diǎn)數(shù)據(jù),增加了實(shí)驗(yàn)的定量性(quantitative robustness);
5)可定制: 用戶可根據(jù)需要定制啟動(dòng)子,修改反應(yīng)體系,監(jiān)測(cè)藥物對(duì)報(bào)告基因的作用。
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